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Notre département phagothérapie s’est intéressé à trois équipements de chromatographie en mode « flowthrough » pour comparer les performances de purification de bactériophages thérapeutiques sur le critère de l’élimination d’endotoxines (LPS). Notre équipe de développement de procédés renforcent ainsi leur connaissance des procédés compatibles avec les BPF pour des applications à diverses échelles industrielles.

L’émergence de bactéries pathogènes résistantes aux antibiotiques est l’une des préoccupations majeures de l’organisation mondiale de la santé (OMS). Une solution possible pour lutter contre ces bactéries antibiorésistantes est l’administration de bactériophages thérapeutiques. L’utilisation de ces virus comme médicaments nécessite l’implémentation de nouveaux moyens de production et de purification des bactériophages thérapeutiques en conformité avec les Bonnes Pratiques de Fabrication ou GMP (Good Manufacturing Practices).

A l’instar des virus produits sur cellules eucaryotes, les bactériophages sont produits par infections de bactéries suivie de leur lyse. Ces lysats bactériens, contiennent, en plus des bactériophages, quantités d’impuretés qu’il convient d’éliminer pour permettre leur administration dans des conditions sûres et dénuées d’effets secondaires indésirables tels que des réactions immunitaires ou des chocs septiques. Pour éliminer ces impuretés, les lysats bactériens sont soumis à des étapes de purification visant à préserver la qualité et l’efficacité des bactériophages tout en réduisant les contaminants résiduels à un niveau acceptable et en maintenant un rendement optimal. Parmi ces impuretés une attention particulière est portée aux endotoxines (EU pour Endotoxin Units), produites par les bactéries gram-négatives, pour lesquelles la plus haute concentration autorisée pour des produits destinés à traitement par voie parentérale, est de 5 EU/Kg/h. L’élimination des endotoxines présente bien souvent un défi car il est difficile de les séparer des bactériophages sans affecter le rendement.

Le département de développement de procédés dédié à la phagothérapie de Clean Cells a travaillé dernièrement à l’identification d’une méthode efficace d’élimination de LPS des préparations de phages. Cette méthode de purification des bactériophages thérapeutiques a été développée avec les requis suivants :

• Être efficace et performante
• Être rapide et simple à mettre en place
• Être applicable à différentes échelles industrielles et en conformité avec les GMP

Dans cette étude, trois systèmes en chromatographie ont été évalués : deux systèmes en mode « flow-through » et un système en mode positif. Une méthode de purification efficace a ensuite été développée en utilisant l’un des meilleurs systèmes afin d’atteindre les critères précédemment définis. Cette méthode permet une réduction de la concentration en LPS de 4 log pour atteindre une concentration inférieure à 1 EU/10⁹ PFU, tout en conservant un rendement en bactériophages proche de 100%.

Vous trouverez les détails de cette étude en cliquant sur ce lien :